МЕТОД ЛЕФФЛЕРА ЭТО

Леффлера метод окраски

Леффлера метод окраски

1) окраска жгутиков бактерий путем последовательного применения протравы (танина) и красителя; 2) окраска дифтерийных бактерий метиленовым синим Леффлера.

1. Малая медицинская энциклопедия. — М.: Медицинская энциклопедия. 1991—96 гг. 2. Первая медицинская помощь. — М.: Большая Российская Энциклопедия. 1994 г. 3. Энциклопедический словарь медицинских терминов. — М.: Советская энциклопедия. — 1982—1984 гг.

Смотреть что такое «Леффлера метод окраски» в других словарях

Техника.
За 1-2 суток до употребления готовят
про­траву, состоящую из 1 мл насыщенного
спиртового раствора ос­новного
фуксина, 10 мл 20% водного раствора танина,
5,5 мл насыщенного на холоду водного
раствора сульфата закисного аммиачного
железа (соль Мора). Перед употреблением
фильт­руют. Препарат, приготовленный
на покровном стекле, фикси­руют и
помещают на часовое стекло. Наливают
протраву и 30-50 с подогревают до отхождения
паров. Дав стеклу остыть, его промывают
водой и, поместив на другое часовое
стекло, красят фуксином Циля 2-3 мин при
слабом подогревании. После тща­тельной
промывки и высушивания препарат готов
для микроско­пирования.

Микроскопическая
картина.
Жгутики окрашиваются в розово-красный
цвет (рис.18).

Серебрение по Морозову

Готовят
3 реактива:
1)1 мл ледяной ук­сусной кислоты, 2 мл
имеющегося в продаже формалина, 100 мл
дистиллированной воды; 2)5 г танина, 1 мл
жидкой карбо­ловой кислоты, 100 мл
дистиллированной воды; 3)5 г кристаллического
нитрата серебра растворяют в 100 мл
дистиллированной воды, отливают 20 мл в
другой со­суд, к оставшимся 80 мл
раствора по каплям добавляют рас­твор
аммиака, пока не растворится образующийся
осадок и не останется легкая опалесценция;
если аммиака будет добавлено слишком
много, то из отлитых в другой сосуд 20 мл
раствора серебра надо добавлять по
каплям до получения нужной слабой
опалесценции. Для окраски препарата
раствор серебра разво­дят дистиллированной
водой 1:10.

Техника.
Наливают на 1 мин первый реактив, сливают,
промывают препарат водой, наливают
второй реактив, подогревают на легком
пламени до отхождения паров (1 мин),
тщательно промывают водой, 1-2 мин при
подогревании обраба­тывают препарат
третьим реактивом до появления
темно-корич­невой окраски мазка,
тщательно промывают водой, высушивают.
Рассматривают с иммерсионной системой.

Микроскопическая
картина.
Жгутики окрашиваются в буро-черный
цвет.

Метод Грея

Растворы,
составляющие протраву, смешивают за
сутки до употребления. Растворы состоят
из: 1)
насыщен­ного водного раствора калийных
квасцов K2SO412Н2О
– 5 мл, 20% водного раствора танина – 2 мл
и насыщенного водного раствора
двухлористой ртути – 2 мл; 2) насыщенного
спиртового раствора основного фуксина
– 0,4 мл.

Техника.
Протраву наливают на препарат на 8-10
мин, затем промы­вают его дистиллированной
водой и окрашивают 5 мин карболо­вым
фуксином Циля. Вновь промывают водой,
сушат на воздухе и микроскопируют.

Микроскопическая
картина.
Жгутики окрашиваются в крас­ный цвет.

Окраска по Шенку

Протраву,
состоящую из двух растворов, гото­вят
за 7-10 дней до употребления. Первый
раствор состоит из 30 мл насыщенного
водного раствора танина и 10 мл 5% вод­ного
раствора полуторахлористого железа,
второй – из 1 мл анилина и 4 мл 95% спирта.

Техника.
На препарат наносят 8 капель первого и
1 каплю второго раствора. После того как
избыток протравы сливают, на п­репарат
наносят краску (без промывания). Красить
можно 1% сафранином в 50% спирте или
метиленовым синим Леффлера. Хо­рошие
результаты можно получить, применив
для окраски смесь 30 мл метиленового
синего Леффлера и 8 мл второго раствора
протравы.

Микроскопическая
картина.
Жгутики приобретают синий цвет.

Леффлера окраска

способ метахроматического выявления йолютиновых зерен у коринебактерий и скоплений нуклеиновых соединений у др. бактерий. Для окраски используют щелочной р-р метиленового синего (см. Красители), к-рый наносят на 3 — 5 мин на фиксированный мазок, после чего смывают водой, мазок высушивают и микроскопируют. Протоплазма бактерий окрашивается в голубой цвет, волютиновые зерна -в темно-синий.

Смотреть что такое «Леффлера окраска» в других словарях

Приготовленный
препарат осторожно фиксируют на пламени
горелки и обрабатывают при подогревании
в течение 0,5—1 минуты протравой следующего
состава: 20% водный раствор танина (100 мл)
+ насыщенный на холоду водный раствор
сернокислого закисного аммиач­ного
железа (50 мл) + насыщенный спиртовой
раствор основного фуксина (10 мл). Препарат
тщательно обмывают слабой струей воды
и слегка высуши­вают на воздухе, затем
окрашивают карболовым раствором фуксина
при подогревании в течение 2—3 минут,
промывают водой и высушивают.

Способ Инуйе

Препарат,
приготовленный со всеми предосторожностями,
подогревают до появления паров в течение
1—1,5 минут в леффлеровской протраве
(способ Леффлера см. выше). Затем протраву
смывают водой до прекращения отхождения
краски и окрашивают мазок в растворе
Мюра, предварительно смешанном и
профильтрованном (см. способ Уварова),
над пламенем в течение 1-2 минут. Препарат
после окраски промывают водой.

Бактерии
окрашиваются в темно-фиолетовый, а
жгутики — в бледно-фиолетовый, красноватый
цвет.

Способ Бениньетти и Джино

За
2—3 дня до окраски готовят следующие
растворы:

Непосредственно
перед окраши­ванием указанные растворы
смешивают в пропорции 1 : 2 : 3,
смесь обязательно фильтруют, затем
наливают на фиксированный препарат,
подогревают в течение 2—3 минут, после
чего препарат тщательно промывают водой
и высу­шивают.

Микроскопическая
картина: тела бактерий — темно-фиолетового
цвета, жгутики — более нежной окраски.
Обычно не во всех точках препарат
одинаково хорошо и равномерно окрашивается.

Этот
способ наиболее доступен для начинающих
и дает вполне удовлет­ворительные
результаты.

Цитоплазматические включения

У
многих бактерий, выращиваемых в
определенных условиях, в результате
обменных процессов в цитоплаз­ме
образуются отложения, которые называют
включениями. Среди них — отложения
жира, поли-β-оксимасляной кислоты,
полифосфата, крахмалоподобных
полисахаридов, серы и различных
кристаллов. Некоторые из них представляют
собой полимеризованные ненужные
продукты, а другие можно отнести к
запасам питатель­ных веществ. Для
выявления этих включений, которые к
тому же преломляют свет, применяется
несколько ме­тодик окраски.

Окрашивание поли-β-оксимасляной кислоты

Для
выявления цитоплазматических включений
в бактериях используют следующий метод:

Включения
поли-β-оксимасляной кислоты выглядят
как черно-синие капельки, в то время как
цитоплазма окрашивается в розовый цвет.

Соседние файлы в предмете Микробиология

Жгутики микроорганизмов
— тончайшие образования (0,02 — 0,04 мкм),
легко отрывающиеся от клетки при
обработке. Это затрудняет их исследование.
В основе методов окрашивания жгутиков
лежит обработка их протравителями, в
результате которой они увеличиваются
в объеме.

Подготовка
материала.
Для подготовки культуры рекомендуется
ежедневно несколько дней подряд делать
пересевы на свежую питательную среду
(в жидкую среду или в конденсационную
воду свежей скошенной агаризованой
среды). В день просмотра материал берут
петлей и переносят в пробирку с 5 — 6 мл
стерильной водопроводной воды, нагретой
до 37 0С.
Не рекомендуется размешивать бактериальную
массу в воде петлей, она сама должна
разойтись в ней в течение 30 — 60 мин.
Прежде чем приступать к
работе,
необходимо проверить подвижность клеток
в висячей капле. В случае отсутствия
подвижности пробирку оставляют в
термостате на 11/2
— 2 сут.

Для приготовления
препаратов необходимы абсолютно
чистые предметные
стекла. Их кипятят в растворе бихромата
калия в крепкой серной кислоте, затем
дважды промывают в растворе едкого
натра. После этого стекла промывают
водой и хранят в банке с 96%-ным спиртом.
Затем ту сторону стекла, на которую
будет нанесен мазок, сильно нагревают
и охлаждают.

Окраска жгутиков по методу Леффлера

Суспензию 12 —
16-часовой культуры бактерий наносят на
предметное стекло и сушат при комнатной
температуре. Допустимо зафиксировать
мазок, быстро проведя его через пламя.
Далее препарат обрабатывают протравителем
3 — 5 мин (способ 1) или 30-50 сек (способ
2), нагревая его до появления паров или
в течение 15 — 20 мин при комнатной
температуре, затем промывают сильной
струей дистиллированной воды 30 с и
высушивают на воздухе. Далее окрашивают
препарат 3 — 4 мин карболовым фуксином
Циля или раствором, содержащим 1 часть
насыщенного спиртового раствора фуксина
и 10 частей воды при легком нагревании
до появления пара. Затем препарат
промывают водой, высушивают и исследуют
под микроскопом с иммерсией. Жгутики и
клетки бактерий окрашиваются в розовый
цвет.

Приготовление
протравителя (готовят
за 1-2 суток перед использованием):

способ 1: 12
г таннина растворяют при нагревании в
48 мл воды, добавляют 30 мл насыщенного
водного раствора железного купороса
(FeSO4)
и 6 мл насыщенного раствора фуксина в
96%-ном спирте. Смесь готовят за несколько
дней до использования, хранят в склянке
с притертой пробкой в темном месте (в
таких условиях может храниться несколько
месяцев). Перед началом работы смесь
фильтруют;

способ 2:
смешивают 20%-ный водный раствор таннина,
1 мл насыщенного спиртового раствора
основного фуксина, 5,5 мл насыщенного на
холоду водного раствора сульфата
закисного железа (соль Мора). Фильтруют
перед использованием.

Метод серебрения жгутиков по Морозову

Состав первого:
1 мл ледяной
уксусной кислоты, 2 мл формалина, 100 мл
дистиллированной воды;

состав второго:
5
г таннина,
1 мл жидкой карболовой кислоты (фенола),
100 мл дистиллированной воды;

состав третьего:
5
г кристаллического
нитрата серебра (AgNO3),
100 мл дистиллированной воды; отливают
20 мл в другой сосуд, а к оставшимся 80 мл
раствора серебра по каплям приливают
водный раствор аммиака (нашатырного
спирта) до растворения образовавшегося
осадка и появления легкой опалесценции.
Если аммиака будет добавлено слишком
много, то из оставшихся 20 мл раствора
серебра следует добавить еще несколько
капель до возникновения опалесценции.

Для окраски
препарата полученный раствор серебра
разводят дистиллированной водой в
соотношении 1: 100.

Жгутики
окрашиваются в буро-черный цвет.

Леффлера методы (F. Loeffler, немецкий бактериолог, 1852—1915) — методические приемы при бактериологических исследованиях, разработанные и введенные в практику Ф. Леффлером. Из них в совр, лабораторной практике применяются: методы приготовления среды для культивирования дифтерийной палочки — среда Леффлера (см. Дифтерия, этиология), способ окраски дифтерийных бактерий и окраска жгутиков у бактерий.

Метод окраски жгутиков по Леффлеру

Культура бактерий выращивается на питательном агаре в течение 12—18 час. при оптимальной температуре. В чистую пробирку помещают 1,5 мл дистиллированной или водопроводной воды. Платиновой петлей берут небольшое количество исследуемой культуры бактерий и несколько раз погружают ее в воду до получения равномерной взвеси. Взвесь ставят в термостат на 10— 20 мин. На чистое, прокаленное предметное стекло, платиновой петлей наносят несколько капель взвеси культуры бактерий и высушивают их на воздухе, а затем быстро фиксируют, проводя через пламя горелки не более 2—3 раз. Фиксированный препарат погружают на 0,5—2 мин. в протраву следующего состава: 20% водный р-р танина — 100 мл; насыщенный на холоду р-р сернокислого железа — 50 мл; насыщенный спиртовой р-р фуксина — 10 мл. Обработку в протраве ведут при слабом подогреве. После протравы препарат тщательно промывают водой и высушивают, а затем окрашивают анилиновым фуксином Эрлиха в течение 2—3 мин. Окрашенный препарат промывают водой, высушивают и микроскопируют.

Модификация метода Леффлера по М. А. Пешкову. Препараты готовят на чистых покровных стеклах. Для окраски необходима протрава из трех р-ров.

1. Насыщенный спиртовой р-р основного фуксина: к 1—2 крупным кристаллам фуксина добавляют 10 мл 96% этилового спирта и ставят в термостат на 1 — 2 часа или на водяную баню при t ° 50°.

2. Водный 20% р-р танина.

3. Насыщенный на холоду р-р соли Мора (сернокислое закисное аммиачное железо). Смешивают 1 мл р-ра 1 и 10 мл р-ра 2; к смеси прибавляют 5,5 мл р-ра 3; на фиксированный препарат с избытком наливают профильтрованный р-р протравы и оставляют его на стекле на 10—15 мин., следя за тем, чтобы жидкость не подсыхала и не подтекала под нижнюю поверхность стекла.

Препарат промывают сильной струей дистиллированной воды (30 сек.). Тонкой тряпочкой удаляют с краев стекла остатки протравы и повторно промывают дистиллированной водой. Обработанный препарат мазком вниз помещают в часовое стекло и подливают профильтрованный фуксин Циля, разбавленный в два раза водой. Окраску производят в течение 3—5 мин., после чего препарат промывают водой.

Библиогр.: Руководство по микробиологической диагностике инфекционных болезней, под ред. К. И. Матвеева, с. 34, М., 1973; Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования, под ред. М. О. Биргера, с. 28, М., 1973. См. также библиогр, к ст. Леффлер Ф.

Д. М. Гольдфарб.

Реклама

ЛЕФЛЕРА МЕТОДЫ ОКРАСКИ

ЛЕФЛЕРА МЕТОДЫ ОКРАСКИ, СРЕДЫ.— 1. Генцианвиолет, или метилвио-л е т. К 100 см3 свежеприготовленной 1%-ной или 2 %-ной карболовой воды добавляется 10 см3 насыщенного спиртового раствора генцианвиолета или метилвиолета (6 В или BN). Красящая способность усиливается от добавления 1 см3 алкогольного раствора метиленовой синьки на каждые 10 см3 указанного раствора метилвиолета. Распространенная краска для окрашивания бактерий.—2. Л. модификация способа Г р а м а. Окрашивают объект в указанном растворе метил- или генцианвиолета 10 мин., промывают в воде, иодируют 2 минуты в Люголевском растворе, погружают на 1 мин. в 5%-ный водный раствор серной или азотной к-ты (или на 10 сек. в 3%-ный раствор соляной), обесцвечивают в абсолютном алкоголе. Ксилол. Канадский бальзам. Способ применяется для окраски бактерий в тканевых срезах.—3. Метиленовая синька. К 30 см3 насыщенного алкогольного раствора метиленовой синьки добавляется 100 см3 0,01%-ного раствора КОН (на 100 см3 дестил. воды 1 см3 1%-ного раствора КОН). Одна из распространенных в бактериологии красок для окрашивания бактерий в мазках, содержащих клеточные элементы; бактерии окрашиваются сильнее, нежели фон из клеточных элементов.—4. Окраска гонококков, а) Фиксация препаратов течение 40 мин. в смеси спирта и эфира (аа); б) окрашивание в течение 1 минуты при легком нагревании в растворе из 4 частей раствора 2,5 г буры иг 1 г метиленовой синьки в 100 см3 дестил. воды, 1 части полихром-ной метиленовой синьки Unna и 5 частей 0,05%-ного водного раствора Bromeosin extra В или extra A. G. ( Hochst); в) промывание водой; г) обесцвечивание в растворе из 177 частей 95°-ного спирта, 20 частей 1°/о0-ного раствора бром-эозина и 3 частей уксусной кислоты; д) промывание водой, высушивание.—Клетки бледнорозового цвета, ядра—бледносинего, гонококки—темносинего. 5. Окраска дифтерийных бац и л. а) Фиксация на легком пламени; б) окрашивание в течение 10 сек. в растворе из 4 частей раствора буры и метиленовой синьки (2,5 г буры + 1 г метилен, синьки + 100 см3 дестил. воды), 1 ч. полихромной метиленовой синьки (Griibler), 5 частей 0,05%-ного раствора Bromeosin extra A. G. ( Hochst); в)  промывание водой; г) обесцвечивание в течение 10 сек. в растворе из смеси 500 см3 25%-ной уксусной к-ты, в к-рой растворен 0,01 г Tropaeolin 00, и 500 см3 спиртового раствора бисмаркбрауна (1 г бисмаркбрауна на 500 см3 Alcohol, absolut.); д) промывание водой, высушивание. Зерна дифтерийных бацил окрашиваются в черный цвет.— 6. Окраска жгутиков. Протрава: 10 см3 20 %-ного водного раствора танина вмешиваются с 5 еж3 насыщенного на холоду раствора сернокислого железа или аммиачных квасцов; добавляется 1 см3 водного или спиртового раствора фуксина, ме-тилвиолета или Wollschwarz.—б к р а ш и-в а н и е. а) Фиксация троекратным проведением через пламя; б) протрава в течение */*—1 мин. с нагреванием до появления паров (по мнению др. авторов необходимо протравить 3—4 раза по 10 сек., смывая в промежутках протраву водой); в) промывание сильной струей воды; г) промывание спиртом для удаления осадка; д) окрашивание в течение 3—4 мин. анилиноводным фуксином •с нагреванием (обычный раствор краски подщелачивается добавлением 1 см31 %-ного раствора NaOH на каждые 100 см3 краски; щелочь можно добавлять и в большем количестве—до начала помутнения раствора); необходимо пользоваться свежим раствором; для окрашивания можно применять концентрированный карболовый фуксин или спиртоводный фуксин; е) промывание водой, высушивание. Указанный способ весьма рекомендуется для окраски жгутиков группы coli-typhus, больших спирил, рго-teus, группы сенной палочки; для окраски холерных и других вибрионов более пригоден способ Цетнова (Zettnow). Способ Леф-лера может применяться для окраски бактериальных капсул.—7. Антиформин-х л ор о формный метод’* обнаружения туб. бацил. Мокрота смешивается с равным количеством 50%-ного антифор-мина, кипятится; прибавляют к 10 см3 раствора 1,5 см3 10 %-ного раствора хлороформа в спирте, энергично встряхивают, центрифугируют 15 минут. Берут пастеровской пипеткой образовавшийся между хлороформом и антиформином слой, размешивают с небольшим количеством белкового раствора на стекле, фиксируют и красят.—8. Окраска сапных бацил. а) Фиксация троекратным проведением препарата через пламя; б) окрашивание в течение 5 мин. в щелочном растворе метиленовой синьки; в) обесцвечивание погружением в 1%-ную уксусную кислоту, имеющую цвет белого вина от добавления водного раствора Tropaeolin’а; г)  промывание дестил. водой; высушивание. От воздействия тропеолина происходит обесцвечивание клеточной плазмы и отчасти ядер, бактерии же не обесцвечиваются. 9. Окрашенные среды для ди-ференциального диагноза с о 1 i-typhus групп ы.—Ж ид кие среды. а) Среда для Вас. t у phi: в 800 см3 дест. воды растворяют при нагревании 40 г сухого пептона и 20 г виноградного сахара; добавляют 30 ем3 нормального раствора КОН и 200 см3 воды, в к-рых размешивается предварительно 20 г нутрозы; затем всыпается 100 г молочного сахара. Среда разливается в колбы объемом в 100 см3 и 3 дня подряд стерилизуется текучим паром по 20 мин. Перед употреблением на 100 см3 охлажденной среды добавляется 1 см3 стерилизованного 0,2%-ного водного раствора ма-лахитгрюна, после чего среда стерильно разливается по 4—5 см3 в пробирки, б) С р е-да для Вас. paratyphi приготовляется, как предыдущая, но без добавления виноградного сахара. В тифозной среде (а) Вас. enteritidis, Вас. paratyphi А и В и coli-бактерии через 24 часа вызывают брожение, заметное благодаря появлению в верхнем слое среды зеленого пенистого кольца; ну-троза при этом выпадает в виде грязных хлопьев. Вас. typhi дает полное свертывание, как в молоке; над свертком—прозрачная зеленая жидкость. В паратифозной среде (б) Bact. coli вызывает брожение с образованием пены, Вас. typhi и paratyphi А не изменяют среды, Вас. paratyphi В и Вас. enteritidis не вызывают брожения, но медленно обесцвечивают среду.—М одифика-ции (Лефлер) среды. 1. К 100 см3 паратифозной среды (б) добавляется 1 см3 0,2%-ного раствора сафранина (Grubler). Среда приобретает тогда серо-фиолетовый цвет. Bact. coli вызывает брожение, Вас. typhi и Вас. paratyphi А дают более темную окраску среды, от Вас. paratyphi В среда приобретает яркий светлокрасный цвет (редукция малахитгрюна). 2. К обеим средам (а и б) добавляется на каждые 100 см3 1 см3 0,2%-ного раствора сафранина, 2 см3 0,2%-ного раствора малахитгрюна и 3 см3 1 %-ного раствора Reinblau. В растворе (а) с виноградным сахаром через 24 часа Вас. typhi вызывает сине-фиолетовое окрашивание и выпадение синего осадка; Вас. paratyphi А—слабое брожение и помутнение среды; Вас. paratyphi В—сильное брожение и сине-красное окрашивание среды; Вас. Gartner’a мышиного тифа, Bact. coli—сильное брожение и сине-красное окрашивание; Bact. paracoli—образование синего осадка. 3. На каждые 100 см3 обеих сред (а и б) добавляется по 1 см3 0,2%-ного раствора сафранина и по 3 см3 1 %-ного раствора Reinblau. Вас. typhi и paratyphi А дают в среде а образование синего осадка, среду б окрашивают в темнофиолетовый цвет; через 36 часов Вас. typhi дает землянично-красное окрашивание, Вас. paratyphi A— фиолетово-синее; Вас. paratyphi В, Вас. Gartner ‘а мышиного тифа вызывают брожение и выпадение осадка—синего в среде й и землянично-красного в среде б; Bact. coli вызывает такое же изменение среды а, брожение, окрашивание среды и образование фиолетового осадка в среде б. Твердые среды. Описанные ниже среды, окрашенные малахитгрюном, обладают способностью задерживать рост Bact. coli и ряда образующих щелочь бактерий; до нек-рой степени происходит и подавление роста Вас. typhi, однако через 24 часа последняя дает на агаре образование мелких прозрачных колоний, превращающихся через 2—4 дня в большие колонии, окрашиваюL щие среду в желтоватый цвет.—М а л а X и т- грюн-агар. К 5л бульона (1 кг бычьего или лошадиного мяса на 5 л воды) добавляется. 150 г измельченного агара, смесь варится в течение 1/2 часа. В случае плохого растворения агара добавляется 35 см3 нормальной НС1, к-рые после растворения нейтрализуются 35 см3 нормального раствора NaOH. Далее среда нейтрализуется содой по лакмусу, затем снова подщелачивается добавлением 25 см3 нормального раствора соды и доводится до кипения. В кипящую жидкость добавляется 500 см3 10%-ного раствора ну-трозы; после нового вскипания горячая жидкость разливается в полулитровые колбы, и среда стерилизуется 2 дня подряд по 2 часа в Коховском аппарате. Прозрачный агар сливается с образовавшегося на дне осадка. На каждые 100 см3 растопленного до жидкого состояния и охлажденного до 50° агара стерильно добавляется 1,5 см3 0,2%-ного раствора химически чистого малахитгрюна на стерилизованной воде. Окрашенный агар разливается в чашки Петри.—М а л а х и т-г р ю н-ж е л а т и н а. 1х/2 кг чистого измельченного бычьего мяса заливается 5 л воды, добавляется 750 г (15%) желатины, 50 г (1%) сухого пептона Витте и 25 г (0,5%) NaCl. Смесь медленно нагревается до полного растворения желатины, после чего варится в течение 3/4 часа. Горячая жидкость нейтрализуется содой по лакмусу. снова доводится до кипения, затем фильтруется. Получается прозрачная золотисто-желтая жидкость. На каждые 100 см3 такой желатины добавляется 3 см3 двунормалыюй фосфорной к-ты и 2 см3 2%-ного раствора малахитгрюна на стерилизованной воде.—■ Малахитгрюн- Reinblau — сафранин-агар. 1 кг измельченного бычьего мяса заливается 5 л воды, кипятится в течение 1 часа, фильтруется, доводится водой до объема в 5 л. К бульону добавляется 150 г (3%) измельченного агара, после чего смесь нагревается до его растворения. Среда нейтрализуется насыщенным раствором соды по лакмусу (чувствительная лакмусовая бумага должна при этом давать: синяя—тем-нофиолетовое пятно, а красная—слабо голубое). После нейтрализации добавляется 25 см3 нормального раствора соды. Среда снова доводится до кипения, к ней добавляют 50 г нутрозы, медленно всыпанных в 500 см3 воды t° в 70°. После нового вскипания среда разливается в полулитровые колбы иенско-го стекла и стерилизуется 2 дня подряд по 2 часа в Коховском аппарате; оставляется в аппарате до охлаждения. На дне колб образуется осадок, агар над ним должен быть прозрачным и обладать светлой желтовато-белой окраской. Появление коричневой окраски указывает на чрезмерное добавление щелочи, подавляющее рост тифозных бактерий. Перед употреблением колба с агаром нагревается в течение одного часа в Коховском аппарате; на каждые 100 см3 прозрачного, полученного сливанием и охлажденного до 45° агара стерильно добавляется: а) 3 см3 стерилизованной и профильтрованной бычьей желчи; б) 1 см3 0,2%-ного стерильного водного расгвора сг.франина (Grtibler); в) 3 см3 1%-ного стерильного водного раствора Reinblau^ (двойной крепости) (Hochst); г) 3—4 см3 0,2%-ного стерильного водного раствора малахитгрюна. После тщательного размешивания среда разливается в чашки Петри. Готовая среда обладает синей окраской с сине-фиолетовым оттенком в падающем свете. 10. Сывороточная среда. Элективная сывороточная среда, предложенная Л. для дифтерийных палочек, приготовляется из 3 частей телячьей или бараньей сыворотки и 1 части нейтрального 1 %-ного сахарного бульона. Указанная смесь разливается в пробирки, к-рым придают наклонное положение, или чашки Петри и нагревается в аппарате для свертывания по 2 часа 3 дня подряд при t° 90—95°. Смесь от нагревания свертывается, и образуется твердая питательная среда. Нагревание необходимо производить медленно во избежание образования на среде пены или пузырьков, ни в коем; случае не допуская закипания находящейся в приборе воды. Сыворотка, содержащая кровяной пигмент, окрашивает среду в сероватый цвет вместо требуемого цвета слоновой кости. Применение щелочного сахарного бульона делает среду мягкой и сообщает ей коричневую окраску. Лит.: Loeffler F., Eine neue Methode zum Farben d. Mikroorganismen, im besonderen ihrer Wim-perbaare u. Geisseln, Zentralbl. f. Bakteriologie, B. V I,. 1889; о н ж e, Weitere Untersuchungen tiber die Bei-zung und Farbung d. Geisseln bei den Bakterien, ibid.,. B. V II, 1890; он же, Der kulturelle Nachweis der Typliusbazillen in Faeces, Erde u. Wasser rait Hilfe d. Malachitgriins, Deutsche medizinisdij Worn-п-schr ft, 1906,№ 8; о н ж е, Neue Verfahren zur Schnell-farbung von Mikroorganismen, insbesondere d. Blutpa-rasiten, Spirocbaten, Gonococcen und Diphtheriebazil-len, ibid., 1907, № 5; он ж е, Zum Nachweis und zur Differentialdiagnose d. Typhusbazillen mittels der Malachitgriinnahrbcden, ibid., 1907, № 39; он же,. Ein neues Verfahren zum Nachweis u. zur Differentialdiagnose der Typhusbakterien mittels -griin-Safranin-Reinblau Niihrbudcn’, ibid., 1909, № 30; о н ж e, Ein neues Anreicherungsverfahren zum farbe-rischen Nachweis sparlicher Tuberkelbazillen, ibid., 1910, № 43.                                              В. Калинин*.

Большая медицинская энциклопедия.
.