МИКРОСКОП КОНФОКАЛЬНЫЙ LSM 780 ЛАЗЕРНЫЙ СКАНИРУЮЩИЙ ZEISS

ZEISS LSM 980 за работой

ZEISS Dynamics Profiler обеспечивает легкий доступ к молекулярной концентрации и динамике в живых образцах. Информация, собранная с помощью детектора ZEISS Airyscan, позволяет охарактеризовать поведение гетерогенной диффузии, что идеально подходит для исследования клеточных конденсатов. Измерения потока определяют скорость и направление активного движения в жидкостях и предоставляют уникальные новые данные, связанные с микрофлюидикой и органами на чипе. Исследуйте даже самые деликатные образцы без чрезмерного воздействия света или длительного времени эксперимента и расширяйте сбор данных для улучшения результатов исследований.​

Улучшение всего конфокального опыта

LSM Plus с легкостью улучшает буквально любой конфокальный эксперимент, независимо от режима обнаружения или диапазона излучения. Деконволюция линейного фильтра Винера практически не требует взаимодействия, обеспечивая при этом надежный количественный результат. Как и в нашей проверенной временем обработке сверхвысокого разрешения Airyscan, базовая информация об оптических свойствах автоматически адаптируется на основе объектива, показателя преломления и диапазона излучения.

Применяйте LSM Plus без дополнительных усилий и получайте преимущества:

Подпись: Яйцевые камеры дрозофилы, окрашенные на F-актин (фаллоидин, пурпурный) и DE-кадгерин (голубой). С разрешения Т. Джейкобса, А. Г. Лушнига, WWU Мюнстер; совместно с Т. Зобелем, Münster Imaging Network, Германия

Уникальное сочетание изображений сверхвысокого разрешения и высокой чувствительности

Airyscan 2 — это зональный детектор с 32 расположенными по кругу детекторными элементами. Каждое из них действует как небольшое точечное отверстие, обеспечивая передачу информации сверхвысокого разрешения, в то время как вся площадь детектора собирает больше света, чем стандартная конфокальная настройка. Это обеспечивает гораздо большую светоотдачу и одновременно захватывает расширенную структурную информацию.

32 просмотра означают больше информации

Каждый из 32 элементов детектора Airyscan имеет немного разный вид на образец, предоставляя дополнительную пространственную информацию, которая делает возможной совместную деконволюцию. Это еще больше уменьшает расстояние, которое можно разрешить между двумя точками – до 90 нм. Ваши эксперименты со сверхвысоким разрешением выиграют от улучшенного разделения одной или нескольких меток.

«Когда мы визуализировали эндоплазматический ретикулум и митохондрии и увидели их очень мелкие детали после применения Airyscan Joint Deconvolution, мы подумали, что это просто супер круто. Новую опцию можно очень легко интегрировать в наши протоколы визуализации. Мы были поражены тем, как изображения были быстро обработаны, что помогло нам принять решения еще во время обработки изображений».

–  Доктор Келли Субраманиан, научный сотрудник, кафедра молекулярной и клеточной биологии, Калифорнийский университет в Дэвисе

Режимы мультиплексирования для Airyscan 2

В режимах Multiplex преимущества детектора Airyscan сочетаются с адаптированными схемами освещения и считывания, предоставляя вам выбор различных вариантов распараллеливания. В мультиплексных режимах используется информация о форме возбуждающего лазерного пятна и расположении отдельных детекторных элементов для извлечения большего количества пространственной информации даже во время параллельного считывания пикселей. Это позволяет делать большие шаги при перемещении лазера возбуждения по полю зрения, улучшая скорость сбора данных. Захват большего количества пространственной информации в плоскости точечного отверстия позволяет окончательно реконструировать изображение с лучшим разрешением, чем выборка сбора данных.

ZEISS Correlative Cryo Workflow — решение, объединяющее световую, лазерную сканирующую и двухлучевую электронную микроскопию в единый и простой процесс для анализа ультраструктур клеток при криомикроскопии. Оно включает в себя аппаратное и программное обеспечение, применяемое для согласования криотемпературных технологических процессов — от локализации флуоресцентных макромолекул до высококонтрастной 3D-визуализации и утонения ламелей для криоэлектронной томографии.

Преимущества ZEISS Correlative Cryo Workflow

1. Упрощенный рабочий процесс и безопасная передача образцов.
Решение ZEISS Correlative Cryo Workflow включает широкопольные микроскопы или конфокальные микроскопы (ZEISS Axio Imager, ZEISS LSM 900/LSM 980 с модулем Airyscan) со сканирующими электронными микроскопами с фокусированным ионным пучком (ZEISS Crossbeam) для получения объемного изображения и эффективной подготовки ламелей для ТЭМ. Специальное вспомогательное оборудование для рабочего процесса и облегчает безопасную передачу витрифицированных образцов между микроскопами. Эти компоненты совместимы со столиком для криокорреляционной микроскопии Linkam CMS196V³ и криосистемой Quorum PP3010Z. Управление данными осуществляется с помощью ZEISS ZEN Connect — программного обеспечения для корреляционной микроскопии, а инструменты ПО ZEN позволяют улучшить результаты.

2. Высочайшая производительность обработки изображений на протяжении всего рабочего процесса

Благодаря криосовместимым объективам и высокой чувствительности детектора ZEISS Airyscan системы ZEISS LSM 900/LSM 980 позволяют обнаружить и локализовать белки и клеточные структуры с высоким разрешением, а бережное освещение предотвращает от девитрификации. Микроскоп ZEISS Crossbeam обеспечивает высококонтрастное объёмное изображение — даже без окрашивания образцов тяжёлыми металлами. Обе методики предоставляют ценную функциональную и структурную информацию для глубокого понимания ультраструктуры.

3. Возможность эксплуатации при комнатной температуре и повышенная производительность

В отличие от других микроскопов, микроскопы ZEISS, задействованные в данном процессе, могут использоваться не только для криогенной микроскопии, но и при комнатной температуре. Перевод приборов из криогенного режима в режим комнатной температуры происходит быстро и не требует специальных знаний. Такая гибкость даёт пользователям больше возможностей и времени для проведения экспериментов и позволяет более эффективно использовать оборудование.

Все новости и мероприятия

3DHISTECH PANNORAMIC Confocal открывает возможности конфокальной микроскопии в сфере клинических лабораторных исследований, обеспечивая беспрецедентное качество изображения и непревзойденную скорость.

3DHISTECH PANNORAMIC Confocal сочетает метод конфокального получения изображения с технологией сканирования образца целиком, обеспечивая быстрое получение изображения максимального качества для применения в сфере молекулярной патологии. Благодаря инновационной технологии получения изображения за счет быстрого светлопольного и флуоресцентного конфокального сканирования 3DHISTECH PANNORAMIC Confocal обеспечивает более эффективную работу научных лабораторий с минимальными эксплуатационными затратами.

Основные характеристики

Инновационная технология визуализации
В 3DHISTECH PANNORAMIC Confocal используется инновационная система конфокальной визуализации со структурированным освещением, которая позволяет избежать ограничений технологии вращающегося диска с точечной диафрагмой. Это позволяет достичь максимальной эффективности освещения с минимальным выгоранием образца и высокой скоростью сканирования. Доступна функция совместной локализации с флуоресцентной подсветкой и светлым полем. Также для обеспечения малоконтрастной светлопольной визуализации используется цифровой дифференциально-интерференционный контраст.

Уникальные технологии повышения скорости
Для повышения скорости сканирования используются такие технологии, как функция предварительного просмотра темного поля и флуоресцентного изображения; светодиодный источник света Lumencor, улучшающий качество освещения; sCMOS-камера для научных исследований, сочетающая в себе высокую чувствительность и низкий уровень шума, обеспечивая короткое время экспозиции, а также автоматическая водно-иммерсионная система для объектива с высокой числовой апертурой. Все эти решения делают скорость сканирования до 20 раз больше по сравнению с технологией вращающегося диска.

Защита от выгорания
Технология структурированного освещения обеспечивает минимальное выгорание образца за счет сбора всего излучаемого образцом света. Аппаратное включение источника света всегда приводит к переэкспозиции, тогда как возможность уменьшить интенсивность освещения способствует сохранению образца. Конфокальный режим с высокой яркостью позволяет обнаруживать слабые сигналы без увеличения интенсивности возбуждающего света.

Низкие эксплуатационные затраты
По сравнению с конкурирующими технологиями (лазерное конфокальное сканирование и метод вращающегося диска) 3DHISTECH PANNORAMIC Confocal имеет уникальное преимущество в плане эксплуатационных расходов: если в других системах используются дорогостоящие лазеры с небольшим сроком службы (1–2000 часов), то светодиодный источник Confocal имеет срок службы более 15 000 часов.

Расширенные возможности работы с изображением
Что не менее важно, Confocal предлагает несколько вариантов экспорта изображений (область интереса, цветная/серая шкала, многоканальное), а также экспорт без потерь в сторонние 3D-приложения.

Компактный представитель лазерных сканирующих микроскопов серии LSM 7, в средней ценовой
категории, для рутинных задач биологии, медицины и материаловедения. Главным преимуществом является прецизионное спектральное сканирование с уникальным вариабельным вторичным делителем луча.

LSM 700 — компактный конфокальный лазерный сканирующий микроскоп. Уникальная конструкция в сочетании с чувствительными детекторами позволяет максимально минимизировать потери сигнала.

Микроскоп оснащен полупроводниковыми светодиодными лазерами, которые являются надежными, долговечными и стабильными в работе источниками возбуждения. Так как лазерные линии микроскопа LSM 700 равномерно распределены по оптическому спектру, нам достаточно всего четырех лазерных линий для работы со всеми известными флуоресцентными красителями.

Система детекции микроскопа имеет два детектора на основе сверхчувствительных фотоэлектронных умножителей, при этом благодаря уникальному запатентованному вторичному делителю луча «VSD» мы можем производить спектральное сканирование без использования многоканальных громоздких детекторов. Такая конструкция делает дизайн микроскопа компактным и удобным для эксплуатации.

Современное программное обеспечение ZEN 2012 обладает функцией Smart Setup, которая позволяет работать на микроскопе даже начинающему пользователю. Вам просто необходимо выбрать нужные флуоресцентные красители из списка, остальные настройки системы программа сделает самостоятельно. Эта функция, а также возможность сочетать любые режимы (временные серии, Z–Стэки, области интереса, и.т.п) в одном эксперименте, является ключевым преимуществом ZEN. Кроме того, программа имеет расширенные возможности по трехмерной реконструкции объектов из полученных серий оптических срезов.

Развитие генной инженерии, протеомики, биотехнологии, современной фармацевтики и биомедицины способствовало быстрому внедрению новых методов конфокальной микроскопии, и в настоящее время они широко используются в клеточной биологии.

Конфокальную флуоресцентную микроскопию можно рассматривать как разновидность традиционной флуоресцентной микроскопии, которая позволяет исследовать внутреннюю микроструктуру клеток, причем не только фиксированных, но и живых, идентифицировать микроорганизмы, структуры клетки и отдельные молекулы, наблюдать динамические процессы в клетках. Конфокальная флуоресцентная микроскопия в дополнение к этому обеспечила возможность трехмерного субмикронного разрешения объекта и существенно расширила возможность неразрушающего анализа прозрачных образцов. Повышение разрешающей способности достигается благодаря использованию в конфокальных микроскопах лазеров в качестве источников света и конфокальной диафрагмы для фильтрации внефокусной флуоресценции. Преимущество лазеров по сравнению с ртутными или ксеноновыми лампами заключается в монохроматичности и высокой параллельности испускаемого пучка света. Эти свойства лазерного излучения обеспечивают более эффективную работу оптической системы микроскопа, уменьшают число бликов, улучшают точность фокусировки пучка света. На образце лазер освещает не все поле зрения, как в ламповом флуоресцентном микроскопе, а фокусируется в точку. Конечно, при этом лазерный луч возбуждает флуоресценцию как в точке фокуса, так и во всех слоях образца, через которые проходит. И если эта внефокусная флуоресценция, излучаемая слоями, расположенными выше и ниже фокальной плоскости, регистрируется вместе с основным сигналом из фокуса объектива, это ухудшает разрешение оптической системы. Избавиться от внефокусной флуоресценции позволяет конфокальная диафрагма. Изменяя диаметр конфокальной диафрагмы, можно определять толщину оптического слоя вблизи фокуса лазерного луча, поэтому флуоресценция, испускаемая выше и ниже фокуса, оказывается дефокусированной на конфокальной диафрагме и не регистрируется. Благодаря этому конфокальная микроскопия обеспечивает улучшенное разрешение, в первую очередь вдоль оси Z.

Современная конфокальная микроскопия позволяет решать три основные задачи: изучение тонкой структуры клетки, колоколизации (пространственного взаиморасположения) в клетке двух или более веществ, а так же исследование динамических процессов, протекающих в живых клетках.

Благодаря улучшенному разрешению, особенно повышенному разрешению по оси Z, и возможности создавать серии «оптических» срезов, конфокальный микроскоп позволяет исследовать тонкую структуру объекта в трехмерном пространстве. Специальные программы позволяют создать из серии оптических срезов объемное изображение объекта (3D) и как бы рассматривать его под разными углами зрения, что может дать ценную информацию о форме клеток, цитоскелете, структуре ядра, хромосомах и даже локализации в них отдельных генов, а так же о взаиморасположении этих элементов.

Использование мультиспектрального (с несколькими флуорохромами) режима работы лазерного сканирующего конфокального микроскопа позволяет исследовать колоколизацию (пространственное взаиморасположение) в клетке двух или более разных веществ, например, белков, помеченных разными флуоресцентными красителями. Исследуя такие препараты в обычном флуоресцентном микроскопе, нельзя с уверенностью утверждать, находятся эти вещества рядом или одно под другим. С помощью метода оптических срезов и дальнейшей 3D-реконструкции объекта можно воссоздать объемное распределение веществ. Мультиспектральный режим так же позволяет проводить на конфокальном микроскопе исследования методом FISH.

Возможность получать временные серии изображений с высоким пространственным разрешением позволяет исследовать изменения, происходящие в клетках и их структурах во времени (4D реконструкция). Кроме того, благодаря наличию лазеров и системы сканирования можно осуществлять не только регистрацию временных изменений, но и осуществлять воздействие на клеточные структуры лазерным излучением с одновременным наблюдением протекающих процессов.

Новые методы лазерной сканирующей конфокальной микроскопии получили широкое распространение в фундаментальных науках, а также все шире применяются в практических исследованиях и диагностической медицине.

Методы конфокальной микроскопии позволяют выявить способность веществ накапливаться в цитоплазме, ядре или других структурах клетки, зарегистрировать образование метаболитов, измерить кинетику накопления и метаболизма веществ в клетке, скорость выведения веществ из клетки, сравнить интенсивность метаболизма в различных клеточных линиях и в различных условиях. Эти методы все шире применяются в исследованиях механизмов действия как канцерогенов, так и лекарственных препаратов и противоопухолевых соединений, позволяют рассчитывать их эффективные концентрации.

Анализ интенсивности и формы спектров собственной флуоресценции позволяет распознавать нормальные и воспаленные клетки, и такой метод, в частности, предложен в качестве нового способа ранней диагностики шейки матки.

Подобрав комбинацию фильтров для нескольких типов собственной флуоресценции, возможно без проведения гистохимического окрашивания и трудоемкого получения и исследования множества срезов различать злокачественные и нормальные тканевые структуры в биопсийных пробах лимфоузлов пациентов с лимфоаденопатией различного происхождения.

Методы конфокальной микроскопии широко применяются в эмбриологии и гидробиологии, ботанике, зоологии при изучении структуры гамет, развития и формирования организмов.

Конфокальная микроскопия постоянно развивается, и в практику внедряются все новые методы исследований для изучения механизмов функционирования организмов на клеточном, субклеточном и молекулярном уровнях, которые с каждым днем становятся все более востребованными в прикладных исследованиях и диагностике. Появление персонального конфокального лазерного сканирующего микроскопа FV10i позволяет расширить границы применения конфокальных методик. Микроскоп FV10i выполняет те же функции, что и высокотехнологичные исследовательские конфокальные сканирующие системы FV1000. В компактный корпус интегрированы все основные компоненты: 4 диодных лазера, спектральный сканирующий детектор, интуитивно понятное программное обеспечение, инкубатор, моторизованный столик, антивибрационная платформа и даже «темная комната». Этот микроскоп идеален для тех, кто только начинает работать с конфокальным методиками, для тех, кто хотел бы освободить исследовательские конфокальные микроскопы от рутинных задач, для диагностических лабораторий, лабораторий с ограниченным бюджетом, для обучающих задач и случаев проведения исследований в условиях ограниченного комфорта, например, на биологических станциях.

Конфокальный лазерный сканирующий микроскоп с уникальной оптической схемой и системой детектирования, которые позволяют получать оптические срезы с максимальной эффективностью. Вы можете работать с мультиканальной флуоресценцией вплоть до десяти красителей и использовать непрерывную спектральную детекцию во всем видимом диапазоне длин волн.

LSM 710 на инвертированном штативе микроскопа Axio Observe Z1 — это непревзойденный конфокальный микроскоп для клеточной биологии и биологии развития. Совместно с прямым штативом AxioImager или AxioEmainer — LSM 710 превращается в инструмент для работы в нейробиологии, физиологии и изучении биовзаимодействий в самом широком спектре экспериментов.

Оптическая схема предполагает использование до восьми лазерных портов и любую комбинацию лазерных линий от близкого УФ спектра до ИК. 34-канальный модуль детекции QUASAR позволяет оптимальную стратегию захвата для различных спектров излучения, без привязки к фильтрам и дихроичным зеркалам. Вы всегда можете направить любую часть спектра сигнала на любой выбранный Вами детектор.

Спектральное сканирование предполагает эксперименты с высоким разрешением и обнаружением до 10 каналов одновременно.

В сканирующем модуле LSM 710 используется передовое техническое решение: возвратный контур спектральной переработки (Spectral Recycling Loop), обеспечивающий усиление сигнала за счет многократного повторного пропускания через спектральную решетку всех неразделенных частей флуоресцентного сигнала. Коррекция плоскости поляризации части флуоресценции увеличивает суммарный эмиссионный сигнал в среднем на 15 -17 %!

Модификация LSM 710 NLO — это лазерный сканирующий микроскоп, оснащенный фемтосекундным мультифотонным лазером, генерирующим излучение высокой плотности в инфракрасной области 680-1080 нм. Благодаря свойствам такого лазера мы можем проникать на глубину до 500 мкм, при этом возбуждение происходит только внутри фокального микрообъема, менее 0,1 мкм3, что позволяет бережно воздействовать на живую ткань.

Inspect Surfaces in 3D with ConfoMap​

ConfoMap is ideal to visualize and inspect surface topography in 3D. Evaluate the quality and functional performance of surfaces in accordance with the latest metrology standards, e.g. I SO 25178. Include comprehensive geometric, functional and roughness studies. Create detailed surface analysis reports. Add optional modules for advanced surface texture analysis, contour analysis, grains and particle analysis, 3D Fourier analysis, analysis of surface evolution, and statistics.

Rely on C Epiplan-APOCHROMAT Objectives

Use the apochromatically- and flat-field-corrected C Epiplan-APOCHROMAT objective series for reflected light applications.

See the effect of objectives for confocal microscopy:

Artifacts at edges and noise on plane surface are not shown in this image.

Artifacts at edges and noise on plane surface are clearly visible in this image.

Choose a Laser Tailored for Your Applications​

Extend the application range of your confocal microscope and select between two options:

Simultaneous Spectral Imaging

To separate even highly overlapping signals or to remove autofluorescence, you can take a Lambda Scan using the complete detection range with up to 36 detectors, keeping both illumination and time required to a minimum. Improve spectral imaging along the complete wavelength range, including Online Fingerprinting, with LSM Plus.

The example shows a murine cremaster muscle, multi-color labeled with Hoechst (blue), Prox-1 Alexa488 (green), neutrophil cells Ly-GFP, PECAM1 Dylight549 (yellow), SMA Alexa568 (orange), VEGEF-R3 Alexa594 (red), platelets Dylight 649 (magenta). Acquired with 32-channel GaAsP detector using Online Fingerprinting.

Caption: Comparison of the improved SNR before and after LSM Plus processing. Courtesy of Dr. S. Volkery, MPI for Molecular Biomedicine, Münster, Germany

Expand Your Imaging Range​

A confocal unit extends your widefield investigations capacity:

Articles Related to LSM 900 for Materials

ZEN microscopy software puts a wealth of helpers at your command to achieve reproducible results in the shortest possible time. A I Sample Finder helps you quickly find regions of interest, leaving more time for experiments. Smart Setup supports you in applying best imaging settings for your fluorescent labels. Direct Processing enables parallel acquisition and data processing. Z EN Connect keeps you on top of everything, both during imaging and later when sharing the whole story of your experiment.

Image with More Sensitivity

Airyscan 2 allows you to do more than any conventional LSM detector. Each of its 32 detector elements collects additional information, while all of them together gather even more light, yielding super-resolution quantitative results. By adding structural information with Joint Deconvolution (jDCV), you can push resolution even further. Or use the Multiplex modes to get super-resolution information up to 10 times faster.

Data Beyond Imaging

Combining laser point illumination, linear scanning, and detectors that can capture the signal in photon counting mode make the LSM 980 more than an imaging device:

Caption:  Fluorescence Correlation Spectroscopy (FCS) principle. Траектория флуоресцентной частицы через объем обнаружения

Универсальный конфокальный микроскоп для расширенной визуализации и топографии поверхности

Подпись: Сверхтонкие оптические срезы микрометрового диапазона

Изобразите весь образец в 3D

Сократите время настройки и ускорьте получение результатов, выполняя анализы и визуализацию без необходимости замены микроскопов.

Ваш уникальный конфокальный опыт для быстрой и щадящей мультиплексной визуализации

Чтобы анализировать жизнь с минимальным вмешательством, вы должны использовать низкую плотность разметки для своих биологических моделей. Это требует превосходных характеристик визуализации в сочетании с низкой фототоксичностью и высокой скоростью. L SM 980, ваша платформа для конфокальной 4D-визуализации, оптимизирована для одновременного спектрального обнаружения нескольких слабых меток с высочайшей светоотдачей.

Визуализация в ближнем инфракрасном диапазоне (NIR)

Расширение спектрального диапазона до ближнего ИК-диапазона позволяет использовать больше меток параллельно. Визуализируйте дополнительные структуры с большим количеством красителей в своих многоцветных экспериментах с помощью детекторов Quasar и NIR, эффективно поддерживающих эксперименты по спектральному мультиплексированию. Флуоресцентные метки N IR менее фототоксичны для живых образцов из-за большей длины волны. Это позволяет исследовать живые образцы в течение более длительных периодов времени, ограничивая при этом влияние света. Кроме того, свет более длинных волн меньше рассеивается тканью образца, что увеличивает глубину проникновения.

Для любого из преимуществ, которые вы получаете с помощью меток NIR, двухканальный детектор NIR сочетает в себе две разные технологии детектора (расширенный красный GaAsP и GaAs) для оптимальной чувствительности до 900 нм.

Клетки Cos-7, DAPI (пурпурный), антитубулин Alexa 568 (синий), актин-фаллоидин-OG488 (желтый) и Tom20-Alexa 750 (красный). Изображение получено в лямбда-режиме в видимом и ближнем ИК-спектре. Отдельные сигналы разделяются с помощью линейного разделения. Проекция максимальной интенсивности z-стека.

Образец любезно предоставлен Урсом Циглером и Яной Дёнер, Цюрихский университет, ZMB, Швейцария.

Микротрубочки клеток Cos-7 (анти-тубулин AF700)

Сравнение детектора ZEISS LSM 980 MA-PMT (слева) и детектора ZEISS NIR GaAsP (справа); возбуждение лазером с длиной волны 639 нм при той же мощности лазера. Диапазон излучения для МА-ФЭУ установлен в пределах 660 – 757 нм, а для БИК-детектора – 660 – 900 нм.

Уникальный конфокальный опыт

Светоэффективный путь луча с возможностью одновременного использования до 36 каналов и полная спектральная гибкость вплоть до ближнего инфракрасного (NIR) диапазона дают вам идеальную основу для многоцветных экспериментов с живыми образцами. Кроме того, LSM Plus легко улучшит все ваши эксперименты. Уникальное сочетание спектральной визуализации с улучшенным соотношением сигнал/шум и разрешением позволяет снизить мощность лазера для экспериментов с живыми клетками.

Подпись: Клетки Cos-7, полученные с помощью LSM Plus, включая NIR-детектор ZEISS в канальном режиме.
Образец любезно предоставлен У. Зиглером и Дж. Дёнером, Цюрихский университет, ZMB, Швейцария.

Комбинирование световой микроскопии и конфокальной визуализации

LSM 900, ваша высокопроизводительная конфокальная платформа, создана для работы с требовательными материалами как в 2D, так и в 3D.

Многофотонная микроскопия с LSM 980 NLO

Многофотонная микроскопия (двухфотонная микроскопия, нелинейная оптическая микроскопия, NLO) является предпочтительным методом неинвазивной и глубокой визуализации тканей живых или фиксированных образцов, особенно в нейробиологии. Многофотонная микроскопия использует тот факт, что более длинные волны (600–1300 нм) меньше поглощаются и меньше рассеиваются тканями, проникая глубже в образец, при этом образуя фокусную точку. Необходимую энергию для возбуждения флуоресцентного красителя обеспечивает не один фотон, а два фотона с половинной энергией каждый. Вероятность того, что два фотона достигнут флуорофора одновременно, достаточна только в фокусной точке. Вот почему излучение света исходит из фокальной плоскости и может быть эффективно обнаружено, создавая оптический срез без точечного отверстия.

Подпись: Энергетическая диаграмма двухфотонной микроскопии

Комбинируйте конфокальные и многофотонные возможности

Получено при двухфотонном лазерном возбуждении при длине волны 1000 нм, обработано с помощью LSM Plus. Образец любезно предоставлен Рыболовным комплексом, Институт Лейбница по альтернативному исследованию – Институт Фрица Липмана e. В. ( FLI), Йена, Германия

Объем 100 мкм был получен с помощью двухфотонного лазерного возбуждения на длине волны 1000 нм с помощью недесканированного детектора GaAsP BiG.2. Набор данных имел цветовую маркировку глубины, а ортогональная проекция была создана с помощью синего цвета ZEN. Образец любезно предоставлен профессором Й. Хермсом, LMU, Мюнхен, Германия.